После присоединения Новгородской земли, Иван III принялся за оставшиеся вне Москвы княжества. В 1483 году князь Тверского княжества Михаил Борисович укрепил свой союз с Литвой против Москвы, женившись на родственнице Казимира IV. Получив известия о случившемся, Иван III пошел войной на Тверские земли. Михаил потерпел поражение, и ему ничего не оставалось, кроме как подчиниться Ивану.

Внешне сделав вид, что он смирился, Михаил тайком предпринимал попытки связаться с Литвой, желая отсоединиться от Москвы. В 1485 году Иван повторно отправился на Тверь. После трехдневной осады города Тверское княжество окончательно сдалось. Жители и бояре с удовольствием перешли на сторону Москвы, а Михаил бежал в Литву.

Так же как и в Новгороде, Иван поселил в Тверских землях московских дворян и бояр, создав себе прочную опору, и в тоже время ссылал тверских феодалов в различные области Московского государства.